降解組建庫流程

1 miRNA切割以後mRNA在第十或第十一個鹼基產生兩個片斷，第一個片斷是5'帽子結構和3'羧基。3'剪切片斷包含自由的5'單磷酸和3'poly(A)尾巴。

2 利用5'adaptor能夠與5'單磷酸基團的RNA鏈接，而缺少5'單磷酸的基團沒法鏈接捕獲miRNA的切割產物，隨後使用oligo(dt)3'-adapter將連有5'-adaptor的3'切割產物反轉錄成cDNA，擴增cDNA後，使用限制性內切酶Mme I對PCR產物進行酶切，酶切長度在20-21bp。將酶切後的3'雙鏈DNA adaptor鏈接並進行PCR擴增，產物凝膠純化以後，創建一個包含經miRNA切割的3'端剪切片斷文庫，用於測序。