PCR | RT-PCR 的原理及應用

生物的東西必需要主動去了解，不然視野容易受到限制，尤爲是分子生物學的核心技術。

 

PCR - 聚合酶鏈式反應

The Complete Guide to PCR (How it Works, Primer Design, and Running Reactions) - YouTube

目的：從DNA雙鏈中擴增出感興趣的區段，用於後續的研究。

原理：DNA結構，雙螺旋，AT、GC配對；DNA雙鏈在臨界溫度會解鏈，退火後又會恢復；引物，DNA複製的起點，之因此須要引物是由於在DNA合成中DNA聚合酶只能把新的核苷酸加到已有的DNA鏈上。

操做核心：wiki上很全面

1. 引物設計，會考慮GC含量，決定退火溫度；

2. 變性、退火和延伸；

 

PCR的應用 - PCR Applications—Top Seven Categories

1. Gene expression
2. Genotyping (detection)
3. Cloning
4. Mutagenesis
5. Methylation analysis
6. Sequencing
7. Medical, forensic, and applied sciences

 

問題：

1.真核生物的組蛋白會影響PCR嗎？

2.爲何須要先後引物，先後引物是如何p出指定區段的？

 

RT-PCR 逆轉錄聚合酶鏈式反應

逆轉錄PCR，就是PCR的一個常規應用，我也跑過，見過龐大的機器，也是先設計引物，而後提cDNA，定量。

一條RNA鏈被逆轉錄成爲互補DNA，再以此爲模板透過PCR進行DNA複製。

PCA咱們是擴增DNA序列，而RT-PCR咱們擴增的是反轉錄出來的cDNA序列，而後再作PCR，把量作上去來檢測，一般會配上一些管家基因做爲對照。

RT-PCR的數據分析能夠參照Y數微信公衆號，代碼很詳細。