ImageJ實用技巧——熒光&明場圖片合併和分割(基本功能篇)

拍免疫熒光或者熒光轉染的時候，必定會遇到不一樣顏色熒光照片合併與分割，以及熒光和明場照片的合併問題。

雖然大部分狀況下，拍照軟件會完成這一工做，但若是想對某一顏色的圖片進行修改，而後再合併，或者提取某一個通道的照片，這時候就須要ImageJ了。

ImageJ中的這一功能較爲基礎，不須要插件，做爲基礎功能篇的第一篇，主要介紹怎麼利用ImageJ對熒光照片合併、分割，以及熒光與明場之間合併。

 

1、不一樣熒光照片合併、分割

（1）合併

一、打開待合併的圖像

三張不一樣顏色的熒光圖像

 

二、合併不一樣顏色通道（Image-Color-Merge Channels）

彈出Merge Channels界面：

總共有7個顏色通道，每一個顏色選擇對應的照片，點擊OK。出現合併後的圖像（Composite）。

但這時候的合併圖像只是三個8-bit的Stacks，若是要保存的話須要把圖像轉換爲RGB模式。

左右調節工具條，發現左上角的顏色信息會變，可是圖片依然是合併後圖像

Tips：若是想要更改某一顏色通道，可使用Channels Tool（Image-Color-Channels Tool），選擇不一樣通道後，對單一通道進行修改，不影響其餘通道。

選擇不一樣Channel，能夠呈現不一樣顏色

 

三、生成RGB的合併圖像（Image-Color-Stack to RGB）

生成一張命名爲Composite的RGB圖像：

命名爲Composite的RGB圖像

注意：這裏必定要Stack to RGB，不然保存後的圖片並非Merge後的狀態。

 

四、保存圖片（File-Save）

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（2）分割

一、打開一張RGB圖像

 

二、將RGB圖像轉換爲Composite圖像（Image-Color-Make Composite）

這時候三種顏色通道都已經分離出來了。這一步是爲了後面能直接分割出三個帶有僞彩的通道。若是直接Split Channels，也會獲得三個通道，可是沒有僞彩。

 

（3）分離不一樣顏色通道的圖片（Image-Color-Split Channels）

 

（4）分別保存圖像（File-Save）

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2、熒光與明場之間合併

作siRNA、慢病毒等轉染實驗時，須要統計細胞的轉染效率。同一視野下，分別拍攝熒光和明場的照片，這時候就須要將熒光和明場照片合併，易於計算帶有熒光標記的細胞。

一、打開熒光和明場圖像

 

二、合併不一樣顏色通道（Image-Color-Merge Channels）

與熒光照片合併的惟一不一樣是：明場照片選擇gray通道：

Tips：若是熒光較弱，能夠單獨對熒光照片增長亮度和對比度（Image -> Adjust -> Brightness/Contrast）。

三、生成RGB的合併圖像（Image-Color-Stack to RGB）

四、保存圖片（File-Save）